酵母提取核酸

脱氧核糖核酸和核糖核酸

核酸

1. 细胞培养和收集

从平板上挑取酵母单克隆细胞接种到 YPD 培养液，然后将其转移到摇床（30摄氏度过夜培养），为了优化产量，在酵母生长对数期收集细胞（OD600大约在 0.5-1），一旦酵母培养液达到一定吸光值，离心沉淀酵母细胞，然后使用裂解缓冲液将酵母细胞重悬，以便裂解细胞。

2. 细胞裂解

2.1 酶解法

酵母细胞壁裂解是难题

酵母细胞壁

破壁方法：蛋白酶结合物理手段可以破坏酵母细胞壁

裂解酵母细胞壁-1
裂解酵母细胞壁-2
没有了细胞壁的酵母细胞，呈现出球状，称为原生质。常用的细胞裂解方法就可以裂解原生质。

化学去污剂十二烷基硫酸钠SDS通常被用来裂解原生质（通过溶解细胞膜来裂解细胞）

2.2 玻璃珠法

加入玻璃珠到细胞中，然后涡旋震荡，可以匀浆酵母细胞

2.3 超声波法

超声波破碎仪产生的超高频声波也能破碎酵母细胞壁，有助于细胞裂解

3. 分离核酸

通常以下两种方法：柱结合和层析法

分离核酸的方法

3.1 柱结合

硅胶柱能特异性结合DNA和RNA，而不结合细胞内其他组分，通过离子交换，结合在柱上的核酸与其他细胞组分分离开后（乙醇或高盐缓冲液洗涤柱子可以清洗掉非核酸杂质），水或低盐缓冲液可进一步将核酸从柱子上洗脱下来。
注意：其中的缓冲液不包含DNA和RNA酶

柱结合法-高盐离冲洗 柱结合法-低盐离冲洗

3.2 相分离

相分离的原理是利用不同性质的溶剂对核酸和蛋白质的溶解度差异来纯化或浓缩核酸和蛋白质。
氯仿加入到细胞匀浆中，导致产生水相（核酸）和有机相（蛋白质）

相分离法

水相中的DNA可以通过乙醇沉淀获得。

4. 应用

4.1 下游分子生物学实验

例如，PCR，Southern Blot，限制性酶切

4.2 基因芯片分析

细胞表达水平的变化，可以通过基因芯片进行检测

酵母基因芯片

例如，两种培养条件下的酵母：过氧化氢培养和对照组。纯化出这两组培养物的mRNA，分别与基因芯片杂交，分析芯片的结果可以看到被氧化应激调控的基因。

4.3 酵母全基因组突变文库

构建酵母全基因组突变文库，该文库用来研究基因的功能，由于酵母基因中插入了称为基因条形码的特定序列。可以同时对4000-6000突变株的基因组DNA进行提取，并做基因芯片分析和测序，根据基因条形码的相对丰度，判断每种突变体在多种条件下的适应度。