模式生物:酿酒酵母

2022-03-28  本文已影响0人  熊猫人和熊猫猫

酿酒酵母是广泛用于世界各地实验室的模式生物之一。由于这种酵母的基因组已被测序,容易进行遗传操作,且易于培养。使得他成为了解基本细胞进程:如细胞分裂和凋亡的宝贵资源。

酵母属于真核生物域(和蘑菇、霉菌一样,酿酒酵母同属真菌门,它们都具有由几丁质构成的细胞壁。几丁质是一种多糖,不仅见于真菌,也存在于昆虫和甲壳类的外骨骼)

酿酒酵母

1. 酵母的生长特性

自然界中,酿酒酵母生活在温暖、湿润、糖分高的环境中。


酵母喜欢生长在葡萄园

在显微镜下观察酵母细胞,通常呈圆形或椭圆形,直径5-10um,大多数的真核生物采用有丝分裂和减数分裂,使得等量的遗传物质和细胞质分配到子细胞中。


酿酒酵母的形态

但是酿酒酵母采用出芽生殖的方式进行细胞分裂。这种无性生殖的过程包括:先在母细胞上生成一个新芽,新芽在整个细胞周期中不停长大,直到发生胞质分裂。不同于典型的真核生物细胞分裂,酿酒酵母的有丝分裂产生两个大小不同的子细胞。


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为什么酵母是一个非常好的用于研究的模式生物?

  • 酵母细胞生长迅速,大约每90min分裂一次
  • 易于培养,仅需简单的设备和技术就可繁殖
  • 酿酒酵母作为第一个基因组被完全测序的真核生物,其基因序列可通过酵母基因组数据库公开获得 www.yeastgenome.org
  • 遗传操作方便

2. 遗传特点

2.1 蛋白同源

许多来自酵母的蛋白质与其他真核生物中的蛋白质有相似的序列,这些蛋白质通常是同源的,它们相似的序列说明这些生物具有共同的祖先。


酵母的蛋白质与其他真核生物中的蛋白质有相似的序列

应用举例:通过研究一个已知的酵母蛋白质的功能,研究人员可以了解到该蛋白质在高等真核生物,如人类中的作用。

酵母蛋白与人类蛋白

2.2 遗传操作的优势

同源重组:通过置换两段相同或相似序列之间的DNA,将载体与宿主基因组DNA的遗传信息进行交换。通过这种方式可以进行基因的敲除或置换。此外,同源重组将外源DNA整合到宿主基因组,所造成的遗传变化在酵母细胞分裂后仍然保留。

同源重组的原理-1
同源重组的原理-2

酵母质粒载体是基因表达载体的一种,既可以在大肠杆菌中、又可以在酵母系统中进行复制与扩增,所以也称为穿梭载体

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它分为整合载体和自我复制载体两类。

酵母整合新质粒是穿梭载体的一种,它可通过同源重组,将外缘DNA插入到酵母基因组当中(同源重组指的是通过置换两段相同或相似序列之间的DNA,将载体和宿主基因组DNA的遗传信息进行交换),通过这种方式进行基因敲除或基因置换。
此外,由于同源重组将外源DNA整合到宿主基因组所造成的遗传变化,在酵母细胞分裂后仍然会被保留。

3. 酵母发展史

3.1 公元前6000年

酵母用于葡萄发酵,生产葡萄酒

酵母用于生产葡萄酒

在古埃及,酵母被用来制作面包

酵母用于面包制作

3.2 1856年

巴斯德发现酵母是酒类酿造和面包制备过程中的关键微生物


巴斯德发现酵母

3.3 1970年

Hartwell 和 Nurse在酵母中发现了调控细胞周期的蛋白


Hartwell 和 Nurse在酵母中发现了调控细胞周期的蛋白

细胞周期是一系列的细胞事件,包括细胞分裂前和DNA的正确复制和分离。细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的发现,以及它们在细胞间期和有丝分裂期相对含量的变化,表明这些蛋白是细胞分裂的关键调控因子。


细胞周期蛋白

这些蛋白的高度保守性,使得在酵母中对他们的研究非常有价值,可帮助我们了解细胞周期蛋白依赖性激酶在多细胞生物中的作用,如细胞周期的失调会导致细胞分裂不受控制,甚至癌症。


细胞周期蛋白的保守性

3.4 1985年

blackburn, Greider和Szostak,对端粒的研究取得了突破性进展,并发现了端粒酶。


端粒酶的发现

端粒是位于染色体末端的重复DNA序列,可以防止基因组DNA被降解。这些重复性序列由端粒酶添加在染色体3'末端,然后DNA聚合酶将后随链的核苷酸补平。端粒与衰老有关,因为这些DNA片段,在生物生命周期中会逐渐变短。


端粒与衰老有关

3.5 1992年

Ohsumi 和他的团队,又有了重要发现:调控并称为自噬的细胞能源再利用过程的基因。


细胞自噬的发现

当营养缺乏时,可被消耗的细胞器被自噬体吞噬。自噬体与溶酶体结合,将细胞器蛋白进一步降解成氨基酸,用于合成新的蛋白,自噬在一些重要的细胞机制,如防止入侵的病菌和肿瘤生长。


细胞自噬

4. 酵母应用

4.1 衰老疾病研究(线粒体自噬)

早老性痴呆症;帕金森病的治疗:酵母可以用于研究线粒体自噬,一种通过自噬体清除受损线粒体的过程,该机制关联以上疾病治疗


线粒体自噬

通过碳源饥饿培养基诱导酵母细胞自噬,荧光显微镜下观察线粒体自噬情况


线粒体自噬

4.2 外源蛋白表达

酿酒酵母用来纯化和表达大量蛋白,如CFTR囊性纤维化跨膜传导调节蛋白。携带CFTR质粒的酵母细胞通过大量培养,离心细胞,分离微粒体。微粒体是细胞被匀浆破碎时,内质网膜结构破裂后重新封闭形成的囊泡。从微粒体中分离并纯化CFTR蛋白。使得科学家通过X射线晶体衍化的方法,对该蛋白结构进行分析。

4.3 人体DNA修复蛋白

酵母也可作为模式系统,研究人体DNA修复蛋白,这些蛋白可检测并修复损伤DNA,从而阻止携带有缺陷基因组的细胞,如肿瘤细胞的增殖


DNA修复蛋白

转化了DNA修复蛋白(WRN)的酵母细胞,涂在选择性培养基上,含WRN突变的细胞形态可通过荧光显微镜观察;通过跑蛋白胶和蛋白免疫印迹法,可检测细胞提取液中WRN蛋白。

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