LAMP 反应原理
2023-02-21 本文已影响0人
PETJO
- 在60-65℃条件下，双链DNA处于解旋与结合的不稳态，其中上游内引物 FIP中的 F2序列区段首先与模板目标区段的单链 DNA中的 F2C结合，在Bst DNA聚合酶的作用下自 F2的3’ 末端延伸启动链置换DNA合成。
001.jpg
- 外引物 F3则与模板 F3c结合并延伸，置换出由 FIP链接的互补单链 DNA，此单链的 F1c与 F1区段互补结构，可通过自我碱基配对形成环状结构。
002.jpg
- 以（2）中合成的5‘ 端有茎环状结构的单联 DNA为模板，下游内引物 BIP的B2序列区段与单链DNA模板的B2c结合，在Bst DNA聚合酶的作用下自 B2的3’ 末端延伸启动链置换DNA合成。
003.jpg
- 外引物 B3则与模板 B3c结合并延伸，置换出由 BIP链接的互补单链 DNA，此单链的 F1与 F1c区段互补，B1c与 B1区段互补，形成哑铃状结构的单链DNA。
004.jpg
- 哑铃状结构以 3’ 末端的F1区段为起点，以自身为模板进行 DNA合成。由此，哑铃状结构转变为茎环状结构，LAMP扩增进入第二阶段。
005.jpg
- 内引物 FIP与（5）步形成茎环状结构的处于局部单链状态的茎环 F2c区段结合启动 DNA链置换合成，所合成并解离得到的单链 DNA部分也可以形成环状结构。
006.jpg
- 随后（6）步形成的环状结构以3’末端的B1区段为起点， 以自身为模板，进行DNA合成延伸及链置换反应。形成1个哑铃状结构的单链 DNA和1个新茎环状结构的 DNA。
007.jpg
- 下游内引物 BIP上的 B2可与（7）步形成的2个茎环状结构的局部处于单链状态的茎环B2c区段结合 DNA链置换合成。
008.jpg
009.jpg
- 类似的反应将无限重复。
010.jpg
