实验复盘㈤----重组质粒DNA大提

Prepare：
50ml 灭菌圆底离心管，10ml 和1.5ml 灭菌离心管，蓝枪头，异丙醇，无水乙醇，8000rpm离心机，65℃水浴锅预热ddH₂O，计时器

无内毒素质粒大提试剂盒（EndoFree Maxi Plasmid Kit）-- 离心柱型

试剂盒产品组成.png
注意事项 ：

• 溶液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于4℃保存；
• 使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀；
• 注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子；
• 使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动；
• ddH₂O在65-70℃水浴中预热。

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Steps:
⑴ 将50ml过夜培养的大肠杆菌菌液分两次加入离心管中，室温8,000rpm离心3min；
⑵ 4ml溶液P1，使用涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀；
⑶ 4ml溶液P2，立即温和的上下翻转6-8次，室温放置5min；
⑷ 4ml溶液P4，立即温和的上下翻转6-8次，室温放置10min，8000rpm，离心10min，转移至过滤器CS1中；
⑸ 3ml异丙醇，转移到吸附柱CP6；
⑹ 10ml漂洗液PW，8000rpm，离心2min，两遍；
⑺ 3ml无水乙醇，8000rpm，离心2min；
⑻ 空甩5min；
⑼ 吸附柱CP6开盖，室温放置5min，
⑽ 加1mLddH₂O洗脱两遍，-20℃保存。

过夜摇的菌液.jpg
过滤后加异丙醇.jpg